Genteknologi i planter og dyr

Genteknologi bruges ikke kun til at ændre mikroorganismers DNA, men også til at skabe transgene planter og dyr, hvor fremmede gener indsættes for at give organismen nye egenskaber. Siden 1990’erne har vi set eksempler på mange forskellige genmodificerede organismer. I de tre cases herunder vil vi kigge nærmere på insekttolerant bomuld, gyldne ris med provitamin A, og geder, der producerer lægemidler i deres mælk.

Case: Insekttolerant bomuld

En af de mest udbredte genmodificerede planter er den insekttolerante Bt-bomuld, der dyrkes på store arealer i bl.a. USA, Kina og Indien. Planten indeholder gener fra bakterien Bacillus thuringiensis (Bt), som gør den i stand til at producere det insektdræbende Bt-toxin (uskadeligt for mennesker). På den måde overtager planten bakteriens naturlige beskyttelse mod skadedyr. Siden 1996 er princippet også blevet brugt i andre afgrøder, herunder majs, soya og kartofler. Bt-majs (MON810) er fx godkendt i EU, men forbudt i flere medlemslande og dyrkes ikke i Danmark. Generelt er EU langt mere skeptisk over for GMO end mange andre dele af verden.

Figur 1 – Høstklar bomuldsmark. Foto: David Nance

I 2009 dækkede Bt-varianter omkring 45 % af verdens bomuldsareal og gav 30–40 % højere udbytte end konventionel bomuld. Det betyder, at over halvdelen af verdens bomuldsproduktion i dag stammer fra Bt-bomuld. Flere udviklingslande har oplevet økonomiske gevinster, og i Indien har især kvinder i landbruget fået forbedrede levevilkår. Selvom Bt-bomuld ikke dyrkes i Danmark, kan tøj, der sælges på det danske marked, fortsat indeholde Bt-bomuld.

 

Bt-toxin

Bt-toxin er et protein, som ødelægger tarmcellerne hos mange insekter. Når tarmen nedbrydes, dør insektet. Bt-bomuld gør det derfor muligt at reducere brugen af kemiske pesticider. Bt-toxin har længe været brugt som sprøjtemiddel i både konventionelt og økologisk landbrug. Ulempen ved sprøjtning er, at midlet kun rammer de insekter, der befinder sig uden på planten. Da bomuldslarver ofte lever inde i planten, kan sprøjtning være nødvendig op til 15 gange pr. sæson, dette undgås ved at få planten til selv at producere toxinet.

Genmodificerede planter med Bt-toxin kritiseres dog for to hovedproblemer:

  1. Insekter kan udvikle resistens mod giften.

  2. Langtidsvirkningerne for miljøet er endnu ukendte.

For at begrænse resistens dyrkes Bt-planter med flere varianter af toxinet. Hvis et insekt bliver resistent over for én variant, dræbes det sandsynligvis af en anden. Derudover skal landmænd etablere såkaldte refugier – områder (20–50 % af marken) med samme afgrøde uden Bt-toxin. Her må almindelige pesticider bruges. Insekter fra refugiet, som ikke er resistente, kan parre sig med eventuelle Bt-resistente insekter fra Bt-planterne. Afkommet bliver oftest ikke-resistent, fordi resistens-genet er recessivt (se figur 2). Dog kan to heterozygote insekter producere Bt-resistent afkom, så refugier mindsker, men forhindrer ikke helt, resistensudvikling.

Arbejdsspørgsmål

  1. Hvordan virker de insekttolerante bomuldsplanter?
  2. Hvilke fordele får bønderne af at bruge insekttolerante bomuldsplanter? Er der også fordele for miljøet?
  3. Hvilken kritik er der rejst imod Bt-bomuld?
  4. Forklar hvilke ting bønderne kan gøre for at undgå at udvikle resistente insekter og hvordan det virker.
  5. Hvordan virker et Bt-frit refugium? Se figur 2.
  6. Diskuter jeres egne holdninger til brug af genteknologi i planter og sæt det i forhold til de dilemmaer, som I tror regeringerne har i udviklingslande som Kina og Indien med fattige bønder og manglende ressourcer.

Figur 2: Krydsning mellem et Bt-resistent og et ikke-resistent insekt giver heterozygot afkom, der dør af Bt-toxinet, da resistens kræver to recessive alleler.

Case: Gylden ris

Gylden ris (Golden Rice) er en genmodificeret plante udviklet for at bekæmpe den udbredte A-vitaminmangel i udviklingslande, hvor ris udgør en vigtig basisfødevare. A-vitamin er nødvendigt for både syn og immunforsvar, og mangel kan føre til blindhed og i værste fald død, især blandt børn.

Projektet blev påbegyndt i 1992 af Ingo Potrykus ved ETH Zürich, og efter syv års arbejde kunne hans forskerteam præsentere en ny genmodificeret ris-sort designet til at afhjælpe den globale A-vitaminmangel. Trods stor opmærksomhed er projektet gennem årene blevet bremset af omfattende godkendelseskrav og de seneste år mødt hård kritik fra blandt andet Greenpeace og andre anti-GMO-aktivistgrupper, som i 2024 formåede at stoppe dyrkning og brug af A-vitamin-beriget ris i Filippinerne.

Figur 3 – Almindelig og gylden ris. Foto venligst stillet til rådighed af Golden Rice Humanitarian Boardwww.goldenrice.org

Figur 4 – Den nye reaktionsvej i den gensplejsede risplante for at omdanne geranylgeranyl-PP til β-caroten. Hver pil er en reaktion (et trin), der styres af et nødvendigt enzym (i kursiv). Enzymerne kommer fra generne psy, crt1 og lcy (nævnt i parentes). Det er altså de tre gener, som skal fungere i risens frøhvide.

Udvikling af planten

Gylden ris har fået tilført to gener, der gør frøhviden i stand til at producere β-caroten, et provitamin som kroppen omdanner til vitamin A. Den gyldne farve skyldes netop dette stof (se figur 3).

Ris danner normalt ikke β-caroten i frøhviden, derfor skulle denne biosyntesevej etableres. Normal ris producerer allerede forstadiet geranylgeranyl-PP, men mangler to enzymer for at kunne synthesere β-caroten. Derfor blev psy-genet fra en påskelilje (coder for phytoen-synthase) og crt1-genet fra bakterien Erwinia uredovora (koder for phytoen-desaturase) indsat. Risen havde i forvejen enzymet lycopen β-cyclase, som udfører det sidste trin i fremstilligen af β-caroten. Reaktionsvejen kan ses i figur 4.

Da resultaterne kom i 2000, var der dog flere udfordringer:

  • Indholdet af β-caroten var meget lavt, så man skulle spise urealistisk store mængder ris for at nå det anbefalede daglige A-vitaminindtag.
  • De anvendte teknologier var patentbeskyttede og krævede licensbetaling.
  • Rettighederne endte hos Syngenta, som dog gik med til at stille gylden ris gratis til rådighed for småbønder med en årsindkomst under 10.000 USD.

Problemet med det lave β-caroten-indhold blev løst ved at optimere de indsatte gener, hvilket resulterede i det, der kaldes Gylden Ris 2.0. Syngenta-forskerne opdagede, at det første trin i biosyntesevejen gik langsommere end de efterfølgende trin. Det kunne ses, fordi der var rigeligt af startstoffet geranylgeranyl-PP, men meget lidt af de næste forbindelser, hvilket tydede på, at enzymet phytoen-synthase (psy) var årsagen til den lave konvertering. Løsningen blev at finde en hurtigere variant af psy-genet. Ved at afprøve psy fra majs steg β-caroten-niveauet 23 gange til 31 µg per gram ris, hvilket betyder, at 72 g tør ris kan dække halvdelen af en 3-årigs daglige A-vitaminbehov, da kroppen omdanner β-caroten til A-vitamin i forholdet 12:1. Figur 5 sammenligner β-caroten-indholdet i den oprindelige Gyldne Ris og Gylden Ris 2.0.

Figur 5 – Udbyttet af β-caroten i den oprindelige gyldne ris i forhold til den forbedrede (2.0), hvor forskerne udskiftede det langsomme enzym gen psy med et tilsvarende fra majs.

Arbejdsspørgsmål

Nogle spørgsmål tager udgangspunkt i teori fra resten af materialet.
  1. Hvordan kan β-caroten være til gavn i udviklingslandene?
  2. Hvordan kan det lade sig gøre, at få en risplante til at danne β-caroten i frøhviden?
  3. Hvilken opgave har generne psy, crt1 og lcy i den gyldne ris? Findes nogle af generne også i almindelig ris?
  4. Hvilken kritik er der rejst af den gyldne ris?
  5. Giv et eksempel på et genteknologisk værktøj, som forskerne kunne bruge for at teste, at de nye gener faktisk var indsat i risplanten?
  6. Forklar hvorfor der var behov for at lave den nye variant gylden ris 2.0.
  7. Hvordan fandt forskerne på at indsætte et nyt psy-gen i gylden ris 2.0 ?
  8. De lokale dyrkningsforhold for ris i Asien er meget varierende, og forskellige rissorter er populære alt efter hvor, man er. Hvordan kunne man tage højde for det, hvis man vil tilbyde bønderne ’den gyldne ris’ tilpasset lokale forhold?

Case: Geden som en moderne medicinalfabrik

Mangel på antithrombin (AT) er medfødt hos ca. 1 ud af 5.000 mennesker og øger risikoen for blodpropper. AT hæmmer nemlig enzymet thrombin, der normalt får blodet til at størkne ved at omdanne fibrinogen til fibrin (figur 6). Balancen mellem thrombin og antithrombin er derfor afgørende for, at blodet kun størkner de rigtige steder.

AT er et stort, glykosyleret protein, og denne glykosylering påvirker bl.a. stoffets halveringstid i blodet. Kompleksiteten betyder at det ikke produceres i simple organismer som E. coli eller gær. Derfor benyttes genetisk modificerede geder til at producere disse komplekse humane proteiner med den rette glykosylering i deres mælk.

Figur 6 – Antithrombins bremsende virkning på blodstørkningen. Antithrombin hæmmer enzymet thrombin, som får blod til at størkne ved at omdanne fibrinogen til fibrin. 

Det færdige produkt, rekombinant humant antithrombin (rhAT), er godkendt i både EU og USA. Før denne udvikling, blev AT udvundet fra menneskeligt donorblod. Dette er en dyr og begrænset ressource, da 20.000 blodportioner kun giver 1 kg AT. En transgen ged kan derimod producere ca. 1 kg rhAT årligt, som oprenses fra mælken og fremstilles som tørt pulver til behandling. Samtidig undgås risikoen for overførsel af sygdomme som HIV eller Creutzfeldt-Jakob fra donorblod.

 

Design af ekspression

For at få geder til kun at producere humant antithrombin (rhAT) i mælken, hvor vi kan udvinde stoffet og ikke i deres øvrige celler, blev genet indsat lige efter promoteren for mælkeproteinet β-kasein. Denne promoter er kun aktiv i mælkekirtlerne, så rhAT dannes og udskilles i mælken på samme måde som naturlige mælkestoffer.

DNA’et med det nye gen blev injiceret i befrugtede ægceller, som derefter blev indsat i hungeder, der fungerede som rugemødre. Efter fødslen blev en hanged med det ønskede gen identificeret ved at analysere DNA’et, bl.a. ved hjælp af Southern blotting. Da kun hunner producerer mælk, kan hangeden ikke selv bruges til at producere rhAT, men den kan videregive de modificerede gener ved parring med almindelige hungeder. De bedste afkom producerede omkring 2 g rhAT pr. liter mælk.

Processen har dog ikke været uden problemer, herunder sterilitet, geder der stoppede med at give mælk for tidligt, samt ændret glykosylering sammenlignet med menneskets (dog viste proteinet sig stadig at være funktionelt). Derudover vil en eventuel forestilling om at kunne udstyre AT-mangel-patienter med frisktappet rhAT-gedemælk vil ikke virke, hvor praktisk tiltalende det end lyder. rhAT vil, ligesom andre proteiner, blive nedbrudt i fordøjelsessystemet. rhAT skal altså gives intravenøst (i blodbanen) og skal derfor først oprenses fra mælken.

Diskussions- og arbejdsspørgsmål

  1. Forklar thrombins betydning for at blod kan størkne.
  2. Hvordan påvirker antithrombin blodstørkningen?
  3. Hvordan kunne forskerne få en ged til at producere humant antithrombin?
  4. Hvorfor brugte forskerne en promoter til at aktivere antithrombin-genet netop i mælkekirtelcellerne? (Overvej hvad der måske kunne ske, hvis der blev produceret store mængder antithrombin i alle gedens celler?)
  5. Hvilke fordele/ulemper er der ved at producere antithrombin rekombinant i en ged ift. udvinding fra menneskeligt donorblod?

Figur 7 – Landbrugsgeder, ikke-genmodificerede. Foto: Fir0002/Flagstaffotos (GFDL 1.2).